色谱柱延长使用寿命的要点是正确使用

色谱柱的柱效率是评价色谱性能的重要指标。混合物能否在色谱柱中分离，不仅取决于选择合适的固定相，还取决于手性色谱柱的操作条件和填充条件。

正确使用高效液相色谱柱包括：安装保护柱、过滤流动相和样品、净化样品、避免柱压过高、注意温度和pH值、正确及时清洗等。

1.安装保护柱

保护柱的作用是过滤掉来自流动相和样品的化学物质“拉圾”同时，还能有效去除流动相和样品中的不溶物。尽管现在的色谱仪在流动相吸入口.进样阀后部及色谱柱两端均设有1个.2μm不同孔径的滤器只能去除不溶性颗粒，不能去除化学污染。因此，有必要安装保护柱，特别是在分析中药时.中成药等复杂混合物和生物样品是保护分析柱的重要措施。

保护柱填料应与分析柱一致，粒径可大于分析柱。保护柱是消耗品。经过一定次数的样品分析（50~100次）后，当柱压明显升高或峰形变坏或基线漂移时，应考虑更换保护柱。

2.过滤流动相和样品

流动相通常由水或缓冲溶液与有机溶剂混合而成。原则上，所有通过色谱柱的流动都应过滤，但在实际操作中应根据具体情况有所不同：当有机溶剂使用色谱纯度、石英亚沸水或其他超纯水时，过滤在保证水和有机溶剂的质量而不受污染时没有更实际的意义。

当流动相中含有缓冲盐时，需要过滤。如前所述，缓冲溶液放置一段时间后根据环境温度不同，夏季一般不超过48h,冬季一般不超过一周)，使用前应重新过滤。

注入流路系统前，样品试液应经0.45μm(0.22μm最好过滤孔径滤膜。注意区分水系和油系，两者不能混用，防止滤膜溶解造成污染。

装有流动相的容器和色谱系统中的在线过滤器应定期清洗和更换，以避免过载。

3.净化样品

样品中含有对色谱柱有害的化学成分，如吸附蛋白质.糖和其他有机分子和强吸附物质，以及可能破坏柱填料的基团离子。样品应在进样前尽可能分离和净化，以去除多余的杂质成分。

4.避免柱压过高

虽然高效液相色谱柱能承受6000 p si (磅/平方英寸)的压力，但过高和过大的压力变化会缩短色谱柱的使用寿命，避免的方法是避免色谱柱的使用寿命

(1)柱压过高时，尽量采用较小的流速，以免超过柱最大允许压力的一半。

(2)当流速较大时，应采用流速梯度的方法使流速分步到位。

(3)使用手动进样阀时，进样阀的切换应尽可能快。否则，超过20%的压力冲击很快就会使柱子报废。使用多柱共用时，应避免在高压下进行柱切换。

5.注意温度和酸碱度

硅胶色谱柱的最高使用温度一般不超过60℃,以低于40℃特别是在流动相动相pH接近使用限度时，应降低使用温度。

过高的温度会加速键合相的水解和硅胶的溶解，从而改变填料的性质，使柱床塌陷，降低柱效，改变峰形。

目前键合硅胶色谱柱标注pH适用范围可达2~10，但在实际使用中应避免pH条件，特别是碱性条件，特别是碱性条件(pH≥8)下使用，如必须在下使用，pH在条件下使用时，可避免柱损伤：

(1)在泵与进样阀之间安装预柱(饱和柱)来饱和流动相

(2)降低使用温度

(3)检查结束后，立即使用与使用的流动相互混溶的流动“温和溶剂”清洗。

6.正确及时的冲洗

在开始测试之前，你应该知道柱子中目前是什么样的溶剂。对于新的色谱柱，如果没有特殊的说明，则是评估报告中使用的流动相。柱中当前的溶剂必须与分析样品中使用的流动相互溶解。如果不能混合，则应使用第三种溶剂与两者混合。