反相色谱柱的影响因素有哪些？

根据其色谱分离模式，液相色谱柱大致可分为正相、反相、离子交换、疏水、体积排除、亲和力和手性。反相色谱柱是以非极性基团载体为填料的色谱柱。

反相柱填料主要以硅胶为基质，表面键合非极性十八烷基官能团(ODS)称为C18柱、其他常用的反相柱还有C8,C4,C2、苯基柱等。还有离子交换柱，GPC柱、聚合物填料柱等。

反相色谱柱的影响因素：

1.柱长

随着柱长的增加，有机小分子和肽的分辨率增加.但柱长的增加并不能显著提高蛋白质和核酸等生物大分子的分辨率.它们通常在较短的柱子上有很好的分离效果。

2.流动相的流速。

有机小分子和肽的分辨率对流动相流速非常敏感。蛋白质和核酸等生物大分子的分辨率不是。流量越小，柱子越长，色谱峰的宽度越大，分辨率越小。色谱上样过程中的流量对动态吸附容量有很大的影响。

3.温度。

随着温度的升高，流动相粘度降低，流动速度加快，流动相与固定相之间的传质速度加快，分辨率增加。同时，随着温度的升高，分子热运动增加，疏水效果减弱。提高温度时，应考虑目标物质的热稳定性。

4.流动相。

流动相大，溶质分布系数越大，洗脱时间越短。RPC采用线性梯度洗脱法，降低流动相极性（含水量）。水是极性的。zui强溶剂通常与反相色谱中的基本溶剂一起使用。在流动相中加入不同浓度的有机溶剂可与水混合，以获得不同强度的流动相。这些有机溶剂被称为修饰剂。反相色谱zui常用的有机溶剂有甲醇和乙腈。此外，乙醇、四氢呋喃、异丙醇和二氧六环也常被用作修饰剂。有机溶剂的梯度也会影响分辨率，梯度越小.分辨率越大。