影响反相键合相色谱柱性能因素和涂渍方法

　　影响反相键合相色谱柱性能的因素有哪些呢。

　　一，硅胶纯度。

　　硅胶纯度对峰形有很大液相，硅胶杂质和残留的金属离子会影响样品的峰形，如果硅胶表面的金属含量高会影响碱性化合物的峰形，易发生拖尾，恒谱生USHAC18色谱柱以全覆盖的键合硅胶为填料，具有优异的稳定性，重复性，高选择性和高分离度等特点。

　　二，颗粒形状及粒径。

　　球形颗粒柱效高，重现性好，柱床结构均匀，不规则的颗粒柱床结构不均匀，流动相线速度不均匀，容易形成谱带展宽，平均颗粒直径，粒径越小，柱效越高，柱压也越高，粒径分布越广则柱效越低色谱柱，压力越大，恒谱生色谱填料均采用球形形状，列如USHBSil色谱柱采用高纯度球形硅胶，金属杂质＜10ppm，具有柱效高和峰形好等特点，可用于分离极性和碱性的有机化合物。

　　三，颗粒表面积。

　　相对而言，高表面积对样品具有较强的保留能力，更大的柱容量和分离度，而低表面积能更快达到平衡状态，更适合梯度洗脱程序。

　　常用的涂渍方法：。

　　（1）“常规”涂渍法，对配比大于5%以上（所谓配比，即固定液与载体的重量比）的固定液，可用“常规”涂渍，其方法是：将一定量的固定液放置在一蒸发皿中，加入适量的溶剂色谱柱，待固定液溶解后，再加入定量的载体，在一般实验室的条件下，固定液可借助溶剂作用涂敷在载体表面上，例如：10%鲨鱼烷固定相的制备即可采用“常规”涂渍法，在粗天平上称取3g的鲨鱼烷放在蒸发皿中，在通风柜中加入能保证完全浸没载体的乙醚溶剂，使3g鲨鱼烷完全溶解后，再徐徐加入30g60——80目的6210载体，固定液在溶剂的作用下涂敷在载体表面上，最后把涂渍上固定液的载体在红外灯下轻轻搅拌，烘干并赶走溶剂，一般要求，烘干后的固定相基本不应有溶剂气味，这样才可装入色谱柱老化后使用。

　　色谱柱对于配比高的固定液，“常规”法完全可以满足其涂渍要求，因为在高温老化时，固定液还有重新均匀分布的机会，但对于配比小于3%的固定液，由于固定液含量少，刚刚铺盖其载体表面时，如果涂渍不均匀，老化也不能完全解决问题，只能采用下述两种方法涂渍。

　　（2）抽空盘涂法，在一个蒸发皿或一个盘中，称取一定量固定液，加入适量的溶剂（合适的量可以按下表大致求出），待其完全溶解后，再加入一定量的载体，将器皿置于真空干燥器中，接水泵抽空5min，脱气，然后取出放在通风柜中，让溶剂自然蒸发或红外灯下烘干，不要搅拌也不要过筛。

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