影响反相键合相色谱柱性能因素和涂渍方法

栏目:行业资讯 发布时间:2022-05-16

  影响反相键合相色谱柱性能的因素有哪些呢。

  一,硅胶纯度。

  硅胶纯度对峰形有很大液相,硅胶杂质和残留的金属离子会影响样品的峰形,如果硅胶表面的金属含量高会影响碱性化合物的峰形,易发生拖尾,恒谱生USHAC18色谱柱以全覆盖的键合硅胶为填料,具有优异的稳定性,重复性,高选择性和高分离度等特点。

  二,颗粒形状及粒径。

  球形颗粒柱效高,重现性好,柱床结构均匀,不规则的颗粒柱床结构不均匀,流动相线速度不均匀,容易形成谱带展宽,平均颗粒直径,粒径越小,柱效越高,柱压也越高,粒径分布越广则柱效越低色谱柱,压力越大,恒谱生色谱填料均采用球形形状,列如USHBSil色谱柱采用高纯度球形硅胶,金属杂质<10ppm,具有柱效高和峰形好等特点,可用于分离极性和碱性的有机化合物。

  三,颗粒表面积。

  相对而言,高表面积对样品具有较强的保留能力,更大的柱容量和分离度,而低表面积能更快达到平衡状态,更适合梯度洗脱程序。

  常用的涂渍方法:。

  (1)“常规”涂渍法,对配比大于5%以上(所谓配比,即固定液与载体的重量比)的固定液,可用“常规”涂渍,其方法是:将一定量的固定液放置在一蒸发皿中,加入适量的溶剂色谱柱,待固定液溶解后,再加入定量的载体,在一般实验室的条件下,固定液可借助溶剂作用涂敷在载体表面上,例如:10%鲨鱼烷固定相的制备即可采用“常规”涂渍法,在粗天平上称取3g的鲨鱼烷放在蒸发皿中,在通风柜中加入能保证完全浸没载体的乙醚溶剂,使3g鲨鱼烷完全溶解后,再徐徐加入30g60——80目的6210载体,固定液在溶剂的作用下涂敷在载体表面上,最后把涂渍上固定液的载体在红外灯下轻轻搅拌,烘干并赶走溶剂,一般要求,烘干后的固定相基本不应有溶剂气味,这样才可装入色谱柱老化后使用。

  色谱柱对于配比高的固定液,“常规”法完全可以满足其涂渍要求,因为在高温老化时,固定液还有重新均匀分布的机会,但对于配比小于3%的固定液,由于固定液含量少,刚刚铺盖其载体表面时,如果涂渍不均匀,老化也不能完全解决问题,只能采用下述两种方法涂渍。

  (2)抽空盘涂法,在一个蒸发皿或一个盘中,称取一定量固定液,加入适量的溶剂(合适的量可以按下表大致求出),待其完全溶解后,再加入一定量的载体,将器皿置于真空干燥器中,接水泵抽空5min,脱气,然后取出放在通风柜中,让溶剂自然蒸发或红外灯下烘干,不要搅拌也不要过筛。

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