手性分析的优化怎么做呢?

栏目:行业资讯 发布时间:2021-06-04
手性分析很关键的一项是流动相的选择,手性分析一般都采用正相,使用zui多的流动相是正己烷、正庚烷、乙醇和异丙醇这四种,其中起洗脱作用的流动相是乙醇和异丙醇,正己烷和正庚烷用来调节流动相的洗脱强度。

  手性分析很关键的一项是流动相的选择,手性分析一般都采用正相,使用zui多的流动相是正己烷、正庚烷、乙醇和异丙醇这四种,其中起洗脱作用的流动相是乙醇和异丙醇,正己烷和正庚烷用来调节流动相的洗脱强度。

手性分析

  做手性分析时一般选用两只柱子:AD-H和IC,基本上这两只柱子可以解决遇到的所有的手性化合物,AD-H是早期我们一直在使用的,后来的IC可以使用更多的溶剂从而提供了更多的选择性,但是习惯先用AD-H做手性分析方法开发,手性分析基本上都用恒流来做,溶剂一般也都是提前混合好再放到仪器上用,主要是因为正相溶剂在仪器上混合效果不好。

  如前边所述,一般情况下拿到一个样品,首先选择的是用正己烷和乙醇做流动相,根据化合物分子结构式来判断其极性的大小,进而来选择流动相的比例,极性大的选择使用的乙醇比例大一点,极性小的选择使用的乙醇比例小一点,乙醇比例一般是从大到小,根据分离情况以5%或10%的比例递减,一般要求*针至少能把样品在相对较短的时间内从柱子上洗脱下来,然后再去做调整,如果开始的时候醇的比例选的过小,样品可能在柱子上一两个小时都洗不下来。消旋体出峰以后如果是一个峰,可以将峰放大,观察有没有分叉的迹象,有的话,可以通过适当的降低醇类的比例来进一步提高分离度,如果分得太开,可以适当的提高醇类的比例来缩短分析时间,通过对流动相比例的调整,使分析时间和分离度都能满足手性分析的要求。

  如果样品在使用一种醇类时没有选择性,即无论怎样减小醇的比例样品都没有分离的迹象,可以换一种醇来试,通常乙醇和异丙醇会有不同的选择性,很多样品乙醇分不开,异丙醇能分离的很好。异丙醇也不行的时候可以尝试在乙醇或者异丙醇里加入合适浓度的叔丁醇或者是甲醇,对于IC色谱柱可以尝试其它如二氯甲烷、乙酸乙酯和甲苯等其它溶剂,每一种溶剂都能为手性分析提供独特的选择性,一般除了乙醇、异丙醇之外我使用zui多的还是叔丁醇,其次是甲醇,叔丁醇可以单独和正己烷做流动相,甲醇必须结合乙醇或异丙醇混合使用。需要着重强调的是,更换醇的种类,有可能会导致对映异构体出峰顺序的改变,使用乙醇的流动相,如果R构型先出峰,更换为异丙醇以后,有可能(不是一定)R构型会后出峰,S构型跑到前边去了。

  虽然提高柱温能够使峰形变窄变细,但是会降低分离度,而且大赛璐的手性柱温度上限就是40度(这一点在超临界流体色谱应用上受限尤为明显),所以优化分析方法时很少有人在柱温上下功夫。另外手性柱分析样品的保留时间受室温变化的影响特别大,通常大家都习惯用消旋体图谱计算对映异构体相对保留时间的方法根据主峰的保留时间来计算异构体的出峰位置。