HILIC色谱柱的分离机理及对保留的主要影响因素

HILIC色谱柱是用来改善反相色谱中保留强极性物质较差的色谱技术。这种技术采用强极性的静相材料，结合高比例的有机相和低比例的水相作为移动相来实现。这种移动相组成尤其有利于提高电喷雾离子化质谱的敏感度。

HILIC柱的分离原理

目前对于分离机理仍存在一些争议，主要涉及以下三个方面：

1. 分配机制

2. 离子交换

3.偶极-偶极相互作用。更多的实验观察结果显示，HILIC色谱柱的样品保留机理涉及氢键作用、偶极作用和静电作用等多种附加效应，这些效应难以明确区分。

HILIC柱对于保留物质的影响有哪些主要因素？

一般认为HILIC色谱柱的保留行为会受到多种因素的影响，包括固定相的功能团、有机改性剂含量、流速、柱温、流动相的缓冲体系pH值、缓冲盐种类和浓度。

固定相上保留行为的主要影响因素是流动相中有机溶剂的比例，比如增加乙腈含量会明显提高保留因子。在HILIC色谱柱分离模式中，溶剂洗脱能力由弱到强的顺序是：丙酮<乙腈<异丙醇<乙醇<甲醇<水，水是较强的洗脱剂。通常使用乙腈-水流动相，保持水的比例在5%-40%以发挥显著的亲水作用。若用甲醇、乙醇、异丙醇替代水相，流动相极性降低，待测物在柱上的保留也会增加。