做液相的小伙伴们,有遇到过这种情况吗?“明明我已经进样了啊,峰呢?”当我们把色谱柱拆下后,连接两通后再次进样,发现还是不能出峰,则是仪器系统出现了问题。检查压力是否正常。若压力偏低,可能存在漏液的地方;若压力偏高,可能存在堵塞的地方,检查堵塞的方法应顺着管路流向从后往前排查;若压力波动大,则可能管路中有污染的地方,应冲洗管路后再进样;若无压力,有可能是没关闭排空阀或者泵头进空气不能吸液。如没关闭排空阀,则流动相去往废液,并没有去到色谱柱洗脱样品。检查是否使用了错误的试剂配制流动相、没有正确的调节流动相pH或流动相比例设置错误,都有可能导致流动相不匹配,出峰提前、延迟或者不出峰。检查是否已开启检测器灯,紫外波长选择不合适,检测器本身出现问题或者样品浓度太低,检测器灵敏度无法检测。
检查是否设置好样品瓶,若设置成了其他样品瓶(这也可能导致出峰提前、延迟或峰形异常)或者没设置样品瓶,仪器空白运行。检查是否是样品稀释浓度太低,导致检测器无法检测到;检查样品量是否充足,若低于0.5ml刻度,则会无法正常吸取样品。
检查是否是进样针进气泡,若进气泡则会导致样品并未真正进样成功,一般通过洗针即可解决。
当我们把色谱柱拆下后,连接两通后再次进样,发现出峰了,则是色谱柱出现了问题。
检查色谱柱是否选择正确,是否与方法匹配,柱效是否正常。
检查是否是平衡不充分,所导致不出峰。若使用离子交换色谱柱,或离子交换模式分析时,初次平衡需要充足的平衡时间,建议使用流动相小流速平衡过夜。