干货 | 你了解手性色谱柱分离原理吗？

手性色谱柱（Chiral HPLC Columns）是由具有光学活性的单体，固定在硅胶或其它聚合物上制成手性固定相（Chiral Stationary Phases）。

广州研创产品图

如下图所示，设对映体的三个原子或基团a、b、c，相应受体的活体作用点为A、B、C，其中一个对映体的a、b、c能与受体的A、B、C很好吻合，至多两个点能吻合，因此两对映体与受体的结合程度就出现差异，相互作用能力不同，表现出不同的生物活性。

这些相互作用点/力包括：

不论是哪类的固定相，都存在一定的空间构型，而固定相的空间结构可形成选择性腔体，被分离的化合物尤其是苯环等环形化合物由于空间结构可被包含于腔体内，形成包埋复合物，从而增强固定相和化合物之间的作用力，而异构体由于空间构型的不同，作用力的强弱之差形成对映异构体的分离。

手性固定相中的氨基甲酸酯基团，可以与手性化合物中的活泼基团通过氢键作用缔合，由于立体结构和氢键作用的不同，所形成的的缔合物稳定性也不同，导致对映体通过色谱柱所需时间不同而将他们分离开。所以，若是被分离的化合物的结构中含有羰基、羟基、酯、酰胺、胺类等官能团时，氢键就起到不可缺少的作用。

此作用力，主要用于蛋白质类色谱柱的手性分离中，疏水作用力主要存在于非极性基团和水之间，通常在反相中进行对映异构体的分离。

偶极-偶极相互作用是极性分子间最普遍的一种相互作用，即一个极性分子带有部分正电荷的一端与另一分子带有部分负电荷的一端之间的吸引作用。

CSP是将手性选择剂包敷或化学键合到固定相(全多孔球型硅胶)表面的色谱柱材料。这种手性固定相与对映体溶质通过相互作用的偶合、形成可逆的不同稳定性的非对映体配合物，从而实现对映异构体分离的方法，其中分离的效率和洗脱顺序取决于复合物的相对强度。

环糊精构型

环糊精分子有着一种特殊的官能团排列方式，所有的羟基都分布在空腔的外侧，其中伯羟基排列在空腔开口较小的一边，而仲羟基均排列在空腔开口较大的一边。这使得环糊精分子具有外侧亲水，而内层相对亲脂的性质。所以具有适合尺寸及形状的亲脂性有机分子，尤其是芳香族化合物，可进入到环糊精的空腔内，与之形成非共价键键合的主-客体包结络合物进行手性分离。环糊精这种特殊的结构，使得它拥有与多糖类手性色谱柱不同的分离特性。