色谱保留时间飘忽不定，如何破案？

液相色谱保留时间总是飘忽不定，令人难以琢磨。根据经验，色谱保留时间不重现分为两种情况：一是保留时间单方向的漂移，即保留时间提前或延后；二是保留时间无规律的波动，即保留时间忽前忽后。

介绍色谱保留时间漂移前，我们先来了解与区分保留时间、死时间、调整保留时间的概念：

调整保留时间=保留时间-死时间

※在实验室条件下（温度、固定相等）一定时，调整保留时间仅决定于组分的性质，因此调整保留时间是定性的基本参数。

那液相色谱中保留时间为何忽前忽后呢？下面我们来说说主要的影响因素及“破案”方法。

若发生保留时间漂移，需要考虑流动相是否已使色谱柱达到充分的平衡。一般情况下，流动相平衡色谱柱需要10-20个柱体积；但如果流动相中有使用弱酸、弱碱、缓冲盐和离子对试剂，或者固定相为正相硅胶等，则需要更长的时间来平衡色谱柱。

这时也可能会导致保留时间的漂移，需要同时观察色谱峰型、柱效、压力的变化情况，推测色谱柱是否被污染。可以根据具体的测试条件来选择适当的溶剂进行色谱柱的冲洗，或更换新的色谱柱。为了延长色谱柱的使用寿命，增加保护柱是非常有效的方法。

确认柱温的准确性，柱温的变化也会导致保留时间的变化。

流动相中某种试剂的挥发，流动相中不同试剂的比例配制有误，也会导致保留时间的变化，需要确认流动相是否新鲜与正确。

观察柱前压力，如果压力不稳定或者偏离正常值，可能是泵流速不准确或者有气泡产生，出现保留时间的不稳定，需要保证仪器流速的准确性与稳定性。

观察系统压力，如果几次进样的压力曲线不能重合或差别比较大，可能是系统存在泄露或堵塞，出现保留时间的不稳定，需要依次排查系统中有无漏液或堵塞异常。

保持保留时间的重复性是重中之重！同时，也要尽可能避免保留时间的漂移！关注保留时间的稳定性也能反映流动相、检测器等的正常情况！