色谱柱的选择原则有哪些

在高效液相色谱分析中，色谱柱的选择直接影响分离效果。选择合适的色谱柱可以缩短方法开发所需的时间，使方法更加稳定。

现在有各种各样的商业液相色谱柱。根据色谱柱的参数，可以提供初步的选择，但由于不同仪器制造商的填充技术和键合技术不同。即使是这样C18柱，不同品牌.同一品牌的不同系列有不同的功能，能够耐受性低pH值的.有耐高温的.适用于碱性样品等。

要做出适当的选择，必须对此有一定的认识和理解。

原则一：看物理性质

柱长，内径，如250*4.6mm。。一般柱长为2-250mm，柱越长，分离度越高，但柱压越高，分离时间越长；然而分离度与理论塔板数的平方根成正比，因此增加柱长并不是最有效的分离方法。一般来说，150mm.5um可提供足够数量的塔板。

粒径影响色谱分离。粒径越小，分离越快，柱效应越高，但柱压力越高，柱容易受到污染，导致柱寿命缩短。常用分析柱通常使用5um填料、复杂的多组分样品通常用于分离.5um粒径，较大的内径制备色谱柱通常使用较大的粒径。如果固定阶段的选择正确，但分离不够，那么选择较小的粒度填充是非常有用的。3.5um填料填充柱的柱效比相同条件下的5um填料的柱效提高近30%；然而，3.5um的色谱柱的背压却是5um的2倍，因此如何选择填料粒径需要根据现实情况而定。

孔径，60A，100A，120A，300A等待。孔径小，孔隙率高，比表面积大，碳负荷高；色谱柱填充孔径应与分子尺寸相匹配，以确保分子自由进出填充孔，并与孔内表面键合相分离。通常，孔径直径是分子直径的3倍以上使用80-120A，大分子使用300A。

通常有球形和不规则形状的颗粒形状，当使用粘度较大的流动相时，球形颗粒可以降低柱压，延长色谱柱的使用寿命。

比表面积，是指每克填料的表面积，如180m2/g—350m2/g，与粒度和孔隙率有关；如果比表面积较大，则会增加样品与键合相之间的反应，增加保留率和分离度；如果比表面积小，则可以缩短分析时间和平衡时间。如果比表面积大或小，这并不比表面积好。有必要选择合适的比表面积。

原则二：看化学性质

硅胶基质:最常见的基质，强度高，易于化学修饰，但使用pH有限值(一般为2-8，特殊装饰可达到1-12)。

聚合物基质:聚苯乙烯-二乙烯基苯或聚甲基丙烯酸酯，化学稳定，应用广泛，pH范围广，疏水性强，蛋白质等样品分离效果好；但强度较小，有机溶剂可能导致聚合物膨胀和损伤，批次重复性差，商业色谱柱不多，一般价格较高。

荷载量：基质表面键合相的比例，荷载量高，保留增加，适合分析非极性化合物。

键合相:不同的键合试剂对化合物有不同的选择，一般长链的烷基键合相不同。(C18.C8)比短链的(C4.C3)稳定性；与极性键合相比，非极性键合相(-NH2)稳定。

密封端：用短链关闭暴露的硅羟基键，减少残留的硅醇基，减少因组分和酸性硅羟基反应引起的色谱峰尾现象。特别是对于极性样品，未密封的色谱柱分离效果较差。

原则三：看正相，反相色谱

目前市场主要以反相色谱为主，约占80%。在了解了色谱柱的基本知识之后，色谱柱的选择就解决了

原则四：根据柱长和内径选择

长度选择：柱越长，柱效越高(n值越大，柱越长，分析时间越长。250-300mm这是最常见的柱长。超过一半的实验室工作使用这种规格的柱子，通常用于分离l中等到复杂混合物从0到50组分；500-600mm，需要较高分辨率的应用程序，通常用于分离超过50个组件或复杂样品，其中含有难以分离的物质。

内径：立柱效率与立柱半径的平方成反比。内径越小，立柱效率越高，但内径越大，立柱容量也越大，允许的样本量越多。当样品输入量超过立柱容量时，由于立柱中的每个理论板无法建立真正的平衡，会导致色谱蜂畸变，降低立柱分辨率，重现性差。因此，对于复杂准确分离的复杂样品，必须使用小内径柱。另一方面，如果样品中存在不同浓度的组分化合物，则必须使用内径较大的柱来增加样品容量。目前，实验室中使用的最常见的柱内径一般为4.6mm。

一般选择原则：分析大分子量化合物，选择大孔径色谱柱；高分子量化合物pH为了提高峰型，延长色谱柱的使用寿命，应选择高封端或特殊封端的色谱柱。